天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶—3mRNA在人脑挫裂伤后神经细胞中的表达

目的：研究天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶（Caspase)－3mRNA在脑挫裂伤患神经细胞中的表达与预后的关系。方法：用原位杂交技术检测脑组织15例Caspase－3mRNA的表达情况。结果：均有不同程度的Caspase－3mRNA表达，死亡组表达值较存活组明显升高，两组之间表达差异有显性意义。结论：脑挫裂伤后Caspase－3mRNA表达程度较高，Caspase－3mRNA过度表达在脑挫裂伤后神经细胞凋亡的调控中起一定的作用。     

反义bcr／abl RNA的体外转录和杂交

为了转录出反义ｂｃｒ／ａｂｌＲＮＡ，我们用逆转录。聚合酶链反应技术将ｂｃｒ／ａｂｌ嵌合转录体接合区扩增，并反向插到ｐＧＥＭ－４Ｚ质粒ＳＰ６ＲＮＡ聚合酶转录起始点下游作为体外转录的模板。限制酶切分析和ＤＮＡ序列分析结果都证实插入片段序列与Ｋ５６２ｍＲＮＡ接合区完全一致。利用体外转录技术，我们成功地转录出跨ｂｃｒ／ａｂｌ接合区反义ＲＮＡ。体外杂交实验的结果表明，该反义ＲＮＡ具有杂交捕获ｂｃｒ／ａｂｌｍＲＮＡ接合区的功能，可应用于选择性抑制含ｂｃｒ／ａｂｌ基因的白血病细胞。     

VEGF反义核酸对 HL-60细胞作用和机制研究

本研究探讨血管内皮生长因子(VEGF)反义核酸对HL-60细胞生长的量效和时效关系，并研究其作用机制以揭示VEGF基因新的功能。用含20个脱氧核糖核酸的反义核酸A7(用计算机模拟设计和实验筛选出的最优序列)全硫代修饰，以脂质体介导进入细胞，培养72小时后用MTT法计算细胞生长抑制率；采用台盼蓝拒染法每24小时观察细胞存活情况并计数；用Giemsa染色观测细胞形态学改变；用流式细胞仪检测细胞凋亡百分数；用VEGF ELISA试剂盒测定蛋白的水平。结果显示，反义药物对HL-60细胞生长有明显抑制作用，呈剂量依赖关系，并且下调VEGF蛋白的表达；反义药物对HL-60细胞的凋亡无明显影响。结论：VEGF反义药物抑制HL-60细胞生长的机制是抑制细胞增殖，而不是促进细胞凋亡，内源性VEGF蛋白具有促进HL-60细胞增殖的功能。     

反义Bmi-1对K562细胞增殖的抑制作用及机制探讨

目前已知Bmi-1对于正常和白血病造血干细胞的自我更新至关重要,而且在正常和白血病造血干/祖细胞增殖活性的调控中Bmi-1是一个最值得关注的基因[3,4].我们通过将反义Bmi-1表达载体用脂质体介导的基因转染法将其导入红白血病细胞系K562细胞中,观察其对K562细胞的体外增殖、细胞周期、P16蛋白及细胞凋亡的影响.探讨Bmi-1反义寡核苷酸抑制白血病细胞增殖的作用机制及在白血病基因治疗中的作用.     

TaqMan实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测新型趋化因子巨噬细胞炎症蛋白-2γmRNA表达水平

目的　建立TaqMan实时荧光定量逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)法检测新型趋化因子巨噬细胞炎症蛋白 2γ(MIP 2γ)mRNA表达水平 ,并对方法进行评估。方法　TaqMan实时荧光定量RT PCR检测MIP 2γmRNA的表达。结果　线性检测范围达 6个数量级 ,最低检测下限为 6× 10 2 拷贝 ,最高检测上限为 6× 10 7拷贝 ,批间及批内变异 <12 2 %。正常Balb/c小鼠心脏、肝脏、肾脏组织均可检测到MIP 2γmRNA表达 ,以心脏表达水平最高。结论　采用TaqMan实时荧光定量RT PCR检测MIP 2γmRNA表达水平准确、特异、灵敏、快速、操作简便 ,具有临床推广价值。     

白细胞介素1α mRNA在神经胶质瘤中的表达及意义

目的定量检测白细胞介素1α（IL-1α）mRNA在神经胶质瘤组织和正常脑组织中的表达,并探讨其与临床特征的关系。方法运用实时荧光定量PCR检测31例神经胶质瘤组织和22例正常脑组织中IL-1α mRNA的表达,分析其与临床特征的相关性。结果IL-1α mRNA在神经胶质瘤组织中的相对表达量为0．10,在正常组脑组织中为0．01,两者差异具有统计学意义（U=207．0,P=0．016）。IL-1α mRNA在WHO Ⅲ-Ⅳ级神经胶质瘤中的相对表达量为0．72,在Ⅰ-Ⅱ级中为0．02,两者差异具有统计学意义（U=36．0,P=0．001）;而IL-1α RNA相对表达量在性别和年龄之间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论IL-1α mRNA在神经胶质瘤组织中呈显著高表达,其可能在神经胶质瘤的恶变过程中发挥重要作用。     

反义AT1R腺病毒穿梭质粒的构建及其在血管平滑肌细胞中的表达

目的　构建含人血管紧张素Ⅱ 1型受体 (AT1R)反义cDNA(ahAT1 )的腺病毒穿梭质粒 ,观察其在血管平滑肌细胞 (VSMC)中的表达 ,为ahAT1抗高血压、PTCA术后再狭窄及肺动脉高压的研究奠定基础。方法　用定向克隆法将人AT1RcDNA反向插入到穿梭质粒pACCMVPLPA的CMV启动子之下 ,即获得重组腺病毒穿梭质粒pAd/CMV .ahAT1。以脂质体包裹质粒并转染VSMC ,用免疫细胞化学方法和图像分析鉴定此质粒对VSMC表达AT1R的影响。结果　AT1RcDNA成功地反向插入到pACCMVPLPA载体 ,与对照组相比 ,pAd/CMV .ahAT1明显抑制了VSMC的AT1R表达 (P <0 0 5 )。结论　成功构建了携带反义人AT1RcDNA的腺病毒穿梭质粒 ,并在血管平滑肌细胞中得到了有效表达     

人参二醇组皂苷对内毒素休克大鼠肾脏TLR2和TLR4mRNA表达的影响

目的 通过观察内毒素休克模型大鼠肾组织中TLR2和TLR4及IκBαmRNA表达变化及人参二醇组皂苷（PDS）对其的影响,探讨内毒素引起肾脏损伤的机制。方法 40只雄性Wistar大鼠随机分为对照组（control）、内毒素休克组（LPS）、地塞米松组（LPS＋Dex）、人参二醇组皂苷低剂量组（LPS＋PDSL）、人参二醇组皂苷中剂量组（LPS＋PDSM）。舌下静脉注射内毒素（4 mg/kg）复制内毒素休克模型,4 h后测定肾组织中TLR2和TLR4及IκBαmRNA的表达。结果 与对照组相比,LPS组TLR2和TLR4 mRNA的表达明显增加,IκBαmRNA的表达明显降低;而LPS＋Dex、LPS＋PDSL和LPS＋PDSM组与LPS组相比,TLR2和TLR4 mRNA表达均降低,IκBαmRNA的表达增加。结论 PDS能够下调肾组织中TLR2和TLR4mRNA表达,上调IκBαmRNA表达,具有减轻LPS引起肾脏天然性免疫反应损伤的作用。     

IGF-IR反义寡核苷酸对食管癌EC9706细胞增殖、分化的影响

目的探讨IGF-IR反义寡核苷酸对食管癌EC9706细胞增殖、分化的影响。方法将4组终浓度为20μmol/L的3条封闭IGF-IR不同基因位点的反义寡核苷酸(ASODN1~3)及1条无关寡核酸(N-ODN)分组转染培养的食管癌EC9706细胞,另一组不转染;应用酸解DNA及甲绿-派洛宁染色技术观察各组食管癌EC9706细胞的增殖、分化情况。结果ASODN1~3转染组增殖型细胞分别为:56%、52%和61%,分化型细胞分别为:44%、48%和39%;N-ODN转染组及无转染组增殖型细胞分别为:82%和86%,分化型细胞分别为:18%和14%。对EC9706细胞的增殖、分化的影响,ASODN1~3组间相比差异无统计学意义(P>0.05),但ASODN1~3转染组与N-ODN转染组及无转染组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论IGF-IRASODN具有抑制食管癌EC9706细胞增殖,促进其分化效应。